Interferencia de pigmentos vegetales al aplicar la técnica XTT a extractos de Buddleja globosa, Senecio tephrosiodes Turcz. Y Equisetum giganteum

Abstract

La técnica XTT se utiliza frecuentemente para determinar la inhibición o estímulo del crecimiento celular, en la búsqueda
de principios activos antitumorales o de sustancias utilizadas para lograr la expansión celular, por ejemplo, de las células madre. Cuando se aplica esta técnica para la extracción de metabolitos secundarios de plantas, los pigmentos interfieren en el proceso con resultados indeseables que conducen a errores. El objetivo de este trabajo es observar la presencia de pigmentos en los extractos de las plantas Buddleja globosa (matico), Senecio tephrosioides Turcz (huamanripa) y Equisetum giganteum (cola de caballo), obtenidos con distintos solventes y observados a 450 nm de longitud de onda indicada por la técnica XTT.

Se usaron diferentes solventes para la obtención de extractos: n-hexano, cloroformo, metanol y agua. El procedimiento experimental consistió en sembrar células madre mesenquimales de cuarto pasaje a una concentración de 5 x 103 células/pocillo en una placa de 96 pocillos, y se añadieron extractos y suero fetal bovino (SFB), según correspondiera. Los cultivos se incubaron durante 24 y 48 horas. Las lecturas se realizaron en un lector de microplacas a 450 nm de longitud de
onda. Se aplicaron los procedimientos estadísticos test de Dunnet, ANOVA y la prueba t-Student. La diferenciación
requiere valores de p < 0.05. Los resultados obtenidos se resumen en las 8 figuras del presente trabajo en las que se observan los valores de densidad óptica (DO) obtenidos de las lecturas del cultivo de células madre  madre mesenquimales incubadas con diferentes concentraciones de extractos (10, 20, 40, 80, 160, 320, 640 y 1280 μg/ml) para las tres plantas estudiadas. Estos resultados muestran que, en muchos casos, existen residuos de pigmentos de las tres plantas hasta en la última etapa del proceso. Los extractos metanólicos del control positivo (CP) Bidens pilosa incubados durante 24 y 48 horas presentaron siempre diferencias significativas con el blanco. No así los extractos de las plantas medicinales en estudio, solo lo hizo el extracto metanólico de Buddleja globosa a altas concentraciones (320, 640 y 1280mg/ml). Se observa que, en general, los valores en DO obtenidos son más elevados en casi todas las muestras incubadas durante 48 horas que las que fueron incubadas durante 24 horas. Las lecturas espectrofotométricas de los extractos nos indican una zona libre de los pigmentos más comunes, que podría ser utilizada para el desarrollo de nuevas técnicas que permitan la evaluación de metabolitos secundarios con efecto expansivo o antitumoral en diversas plantas medicinales. La zona va de 574 a 586 nm.