Técnica XTT: Pigmentos interferentes en fracciones de extracto metanólico de Bidens pilosa

Abstract

El objetivo es determinar la presencia de pigmentos vegetales que interfieren con lecturas espectrofotométricas de extractos de plantas medicinales y sus fracciones químicas en una longitud
de onda de 600 nm, para establecer protocolos que permitan aplicar la técnica XTT o sus modificaciones y detectar metabolitos secundarios que estimulen o inhiban el crecimiento celular. Se ha trabajado con extractos y fracciones cromatográficas de Bidens pilosa (Amor seco) aplicando la técnica XTT, pero en una zona de longitud de onda espectrofotométrica de 600 nm, diferente a la indicada tradicionalmente
por los proveedores de los reactivos, que es de 450 a 500 nm. Los procedimientos de separación química y cromatográficos se han efectuado con los solventes metanol, cloroformo, acetona y acetato de etilo. Los equipos utilizados son el espectrofotómetro Pharo 300, para mediciones en el rango UV/ VIS, y el lector de microplacas de absorbancia ELx808, para ejecutar la prueba de Elisa. Los resultados se muestran en ocho figuras para la densidad óptica (DO) y una figura para la tasa de estímulo del crecimiento (TEC). Las fracciones ASAR, ASAA y ASF7 no muestran diferencias al compararlas con los valores blanco y control positivo. Se han analizado procedimientos que muestran presencia o ausencia de los pigmentos vegetales que acompañan a los extractos metanólicos de Bidens pilosa y algunas de sus fracciones que muestran las desviaciones que ocurren cuando se quiere encontrar metabolitos secundarios que estimulen o inhiban el crecimiento celular. Los resultados a una longitud de onda de 600 nm no deberían ser positivos, ya que la mayoría de pigmentos presentan sus picos en la zona que se extiende de 450 a 550 nm. Sin embargo, lo son, pero en menor grado, con una DO de 0,584 y 0,767. En conclusión, las fracciones ASAR, ASAA y ASF7, libres de pigmentos, pueden ser útiles para desarrollar técnicas de tinción que se lean a una longitud de onda de 600 nm al efectuar mediciones en un lector de microplacas. Estas podrían obtenerse con separaciones químicas a las que después se aplican procedimientos cromatográficos.