Revisión de la técnica XTT. Innovaciones para superar variables interferentes en extractos de Bidens pilosa

Abstract

Los estudios que investigan efectos anti­tumorales se van incrementando signi­ficativamente desde el descubrimiento del paclitaxel (taxol), principio activo proveniente de la planta Taxus brevifolia y aprobado por la Food Drug Administra­tion para el tratamiento de diversos tipos de cáncer. Un aporte destacado en esta búsqueda lo proporcionaron las técnicas que utilizan derivados de las sales de tetrazolium, particularmente la técnica XTT, de la que nos ocupamos en este estudio metodológico. El problema radica en ciertas imprecisiones y resultados a veces inciertos que presenta su aplica­ción, particularmente cuando esta ocurre con plantas medicinales constituidas por pigmentos, principalmente clorofila y betacaroteno. Los objetivos de este trabajo experimental son determinar si el extracto metanólico de Bidens pilosa es un estimulante mejor que el suero fetal bovino para la expansión de las células madre mesenquimales humanas, y a la vez perfeccionar la técnica XTT para superar, de manera simple, los problemas antes expuestos. Después de extraer las muestras con metanol a 40 °C, se verificó su efecto proliferativo sobre las células madre mesenquimales utilizando los procedimientos establecidos para el efecto y cuantificando los resultados mediante la técnica colorimétrica XTT. En el diseño experimental, las pruebas con los extractos se prepararon en concen­traciones crecientes, desde 0,625 μg/mL hasta 160 μg/mL, y las pruebas compa­rativas consideraron las pruebas blanco, una para cada concentración, con todos los elementos que conformaban las pruebas experimentales, pero sin células madre. Para el control positivo se usó suero fetal bovino al 10%. Se concluye, a partir de los resultados obtenidos, que el extracto metanólico de Bidens pilosa no estimula la expansión de las células madre mesenquimales humanas, a dife­rencia del suero fetal bovino, que sí lo hace. Las pruebas estadísticas consi­deran p = < 0,05 en todos los casos. Se propone una fórmula más simple, pero más segura para este caso, eliminando la medición de referencia que usual­mente se elegía entre 630 a 690 nm de longitud de onda.